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与动植物类作品不同的是，“二居”的山水画多为仿古之作，如在款识中注明是仿倪瓒、仿唐寅等。人物画方面，居巢画过一些仕女和戏曲人物，居廉则画过锺馗、南极仙翁、罗汉、文人墨客、村女和仕女等，多属普罗大众喜闻乐见的题材。
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    就目前所能见到的“二居”绘画题材而言，虽然也有山水类和人物类，但数量最多的还是动植物类。可以毫不夸张地说，“二居”作品中所描绘的动植物种类之繁多是前无古人的，这已构成对传统中国画分科的挑战。若按照传统的分类法，中国画根据题材分为山水、花鸟、人物三科。但“二居”的作品中有不少物种根本无法在这三科中找到对应的位置，比如居廉曾画过前人从未涉足甚至一般人见所未见的动物如大鲵、蛏子、平鳍鳅鱼等，如果勉强分类，只能归入“花鸟”，虽不合理，却也无奈。这使得传统中国画分科陷入了一个尴尬的境地。有鉴于此，不少研究者对“二居”动植物类的绘画题材作了重新分类，并将各类题材的内容作了归纳，如：,
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